In vitro oxidant effects of D-glucosamine reduce adhesión and biofilm formation of Staphylococcus epidermidis / Los efectos oxidantes de la D-glucosamina in vitro reducen la adhesión y formación de biofilms de Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus epidermidis is a common pathogen in medical device-associated infections. Its major pathogenic factor is the ability to form adherent biofilms. In this work, three S. epidermidis strains isolated from infected catheters were chosen with the objective of investigating the effect of D-glucosamine (D-Glu) on reactive oxygen species (ROS) production, adhesion and biofilm formation. The chemiluminescence and nitroblue tetrazolium reduction assays were used to determine ROS production by planktonic S. epidermidis and the microtiter plate assay to quantify in vitro biofilm formation. D-Glu generated a dose-dependent increase in ROS in planktonic cells with maximum stimuli at a concentration of 0.05 mM, and reduced adhesion and biofilm formation. On the other hand, glucose showed an antioxidative stress action and promoted biofilm adhesion and growth. This study suggests a potential application of D-Glu against infections associated with indwelling medical devices, since the oxidative stress caused by this hexosamine in planktonic S. epidermidis contributed to reducing biofilm formation.

Staphylococcus epidermidis es un patógeno común en infecciones asociadas a dispositivos médicos. Su factor de patogenicidad más importante es la capacidad para formar biofilms. Se trabajó con tres cepas de S. epidermidis aisladas de catéteres, con las que se efectuaron ensayos de quimioluminiscencia y de reducción de azul de nitrotetrazolio, para determinar la producción de especies reactivas del oxígeno (ERO) en S. epidermidis planctónico, y ensayos dirigidos a cuantificar la formación de biofilm in vitro, empleando placas multipocillos. La D-glucosamina generó un aumento dependiente de la dosis en la producción de ERO en las células planctónicas, con un estímulo máximo a una concentración de 0,05 mM. Este aumento condμlo a la reducción de la adhesión y de la formación de biofilm. La adición de glucosa, en cambio, mostró un efecto anti estrés oxidativo y promovió la adhesión y el crecimiento de biofilm. Este estudio sugiere una posible aplicación de la D-glucosamina contra las infecciones asociadas a dispositivos médicos, ya que el estrés oxidativo provocado por esta hexosamina contribuyó a una menor formación de biofilm.

Beneficial effect of Berberis buxifolia Lam, Ziziphus mistol Griseb and Prosopis alba extracts on oxidative stress induced by chloramphenicol / Efecto benéfico de extractos de Berberis buxifolia Lam, Zizyphus mistol Griseb y Prosopis alba sobre el estrés oxidativo inducido por cloramfenicol

The chemiluminescence of luminol, a measure of oxidative stress, increased immediately as a consequence of reactive oxygen species (ROS) stimulated by this antibiotic. The effect of Ch was dose dependent with maximum stimulus at 8 mg/ml (Vmax); above this concentration the cells began to reduce the production of ROS. The oxidative injury of Ch was counteracted by water extracts of Berberis buxifolia lam, Zizyphus mistol Griseb and Prosopis alba, indigenous fruits from Argentina. The relatively light units (RLU) emitted decreased immediately as a consequence of a protective effect exerted by the extracts of these fruit extracts on blood cells. The three indigenous fruit extracts reduced to a different extent the oxidative injury caused by Ch. B.buxifolia lam exhibited the highest antioxidant capacity followed by Z.mistol Griseb. Water extracts of both fruit extracts were the most effective against the oxidative stress, while P.alba presented better antioxidant capacity in the ethanolic fraction obtained. Hexane extracts showed low protective action on blood cells, with little reduction of area under curve (AUC) of RLU plotted versus time. Leukocytes remained viable in blood samples incubated for 3h with Ch and water extracts of B. buxifolia lam or Z. mistol Griseb (97.1% and 92.5% viability by Trypan blue exclusion, respectively); whereas with Ch only the cells were stressed and viability decreased to 30%. The three fruit extracts protected the viability of leukocytes in parallel with the decrease of ROS. Erythrocytes were not lysed in the presence of Ch.

Se estudió el efecto antioxidante de tres extractos de frutas autóctonas, Berberis buxifolia lam (michay), Zizyphus mistol Griseb (mistol) and Prosopis alba (algarrobo). Las células sanguíneas humanas sufrieron estrés oxidativo por acción de cloramfenicol (Ch), con un aumento inmediato de especies reactivas del oxígeno (ERO), que fue determinado por quimioluminiscencia con luminol. La respuesta fue dependiente de la dosis, con un máximo a 8 mg/ml. Los extractos de frutas autóctonas de la Argentina fueron capaces de contrarrestar el estrés generado por el antibiótico. El michay y el mistol resultaron más efectivos en la fase acuosa, y el algarrobo fue más antioxidante en extractos etílicos, mientras que las fracciones obtenidas con hexano no fueron activas. La viabilidad de los leucocitos se mantuvo elevada con Ch en presencia de extractos, entre 92.5 y 97.1%, cayendo hasta un 30% con Ch solo. Tanto los eritrocitos como los leucocitos fueron protegidos del efecto estresante por la capacidad antioxidantes de los extractos de las tres frutas investigadas, lo que podría ser importante a considerar en la dieta de niños, y pacientes en general, sometidos a Ch u otras terapias causantes de estrés oxidativo.

Producción y sensibilidad a microcinas en cepas de Pseudomonas aeruginosa / Pseudomonas aeruginosa microcins: production and sensibility

Se aislaron cepas de Pseudomonas aeruginosa de distintos procesos infecciosos con el objeto de estudiar la capacidad de producir microcinas y la sensibilidad a las elaboradas por otras cepas. Se investigaron por el método de estrías cruzadas en condiciones mínimas de crecimiento y en agar nutritivo, siendo más adecuado el primero. Se analizó el efecto de la presencia de metionina en medio mínimo. El tamaño molecular de las bacteriocinas se estimó con membranas capaces de retener moléculas mayores de 8000 daltons. Los resultados obtenidos indicaron una alta incidencia de cepas productoras de microcinas (85,7 por ciento). La sensibilidad a las mismas fue variada desde 0 a 10 cepas susceptible. Al mantener P. aeruginosa en el laboratorio se redujo el espectro de actividad, mientras que las recientemente aisladas inhibieron mayor número de cepas. Se observó también que disminuyó la sensibilidad a microcinas al conservarse las cepas por más de seis meses. Es conveniente realizar tipificación mediante microcinas con bacterias mantenidas por poco tiempo en cultivo

Inactivación de ß-lactamasas por sulbactam en presencia de anticoagulante y en anaerobiosis / ß-lactamase inactivation by sulbactam in aerobiosis and anticoagulant

Se aislaron cepas de Staphylococcus aureus resistentes a penicilina y productoras de ß-lactamasas. Mediante el método de dilución en tubos, se calculó la concentración inhibitoria CIM para amoxicilina-sulbactam, con diferente tensión de oxígeno y frente a heparina. Los valores de CIM se redujeron significativamente al sumar sulbactam al antibiótico. La disminución del oxígeno no afectó la capacidad inhibidora de ß-lactamasas del sulbactam, del mismo modo que la presencia de heparina no interfirió en su efecto protector sobre la amoxicilina. Estos resultados reafirmaron el concepto de efectividad de la combinación amoxicilina-sulbactam sobre los procesos infecciosos a S. aureus productores de ß-lactamasas, aun en afecciones donde se genera anaerobiosis relativa y también en enfermos con tratamiento simultáneo con heparina

Método para cuantificar actividad proteolítica sobre sustratos insolubles coloreados / Method for quantitative proteolytic activity about stained substrates insoluble

Se cuantificó la actividad proteolítica de Staphylococcus aureus aislados de infecciones del hombre, aplicando una modificación de la técnica efectuada por otros autores con Pseudomonas aeruginosa. Además del polvo de piel coloreado con Azul Brillante de Remazol utilizado con esta bacteria, se prepararon otros sustratos insolubles, tales como elastina-Rojo Congo, colágeno-Rojo Congo y polvo de ubre-Rojo Congo. Fue posible comprobar mayor actividad proteolítica sobre colágeno que sobre elastina, mientras que con los extractos o polvos tisulares se evidenció más proteólisis con polvo de ubre de vaca (PUH) que con polvo de piel (PPA). Cabe destacar que las cepas procedían de infecciones humanas, incluyendo afecciones no epidérmicas y una de colección ATCC. El método desarrollado constituyó una ventaja con respecto a las técnicas clásicas de bacteriología que detectan cualitativamente la actividad proteolítica

Infección intrahospitalaria a Pseudomonas diminuta susceptible a piocinas / Intrahospitalary infection to pseudomanas diminuta susceptible to piocins

La incidencia de las infecciones por Pseudomonas ha incrementado especialmente en pacientes hospitalizados. En nuestro medio se identifican con cierta frecuencia Pseudomonas de diferentes materiales biológicos (orina, secreción óptica, lesiones fistulares, septicemias, catéteres y otros). Se aisló un total de 31 cepas de Pseudomonas de las cuales el 90% correspondió a P. aeruginosa y en dos casos se identificó P. diminuta, proveniente de dos pacientes internados en el hospital durante un tiempo prolongado. En uno de ellos se aisló de hemocultivo seriado y en el otro de lesiones fistulares. Ambas cepas presentaron el mismo biotipo, espectro de sensibilidad a antimicrobianos e igual susceptibilidad en la investigación de efecto inhibitorio sobre cepas del género. Este ensayo de detección de actividad bacteriocínica permitió confirmar la sospecha de una infección adquirida en el hospital.

Produccíon de pioverdina por Pseudomonas fluorescens en sangre humana a 4ªC: asociacíon a proteínas y efecto citotóxico del pigmento / Production of pyoverdin by Pseudomonas fluorescens in human blood at 4 degrees C: association with proteins and the cytotoxic effect of the pigment

Se purificó pioverdina de pseudomonas fluorescens desrrollada en medio sintético y se practicó un ensayo de toxicidad pra leucocitos totales humanos (LTH); se observó un alto índice de muerte y lisis celular, dependiendo de la concentración y tiempo de incubación. Dosis sublíticas redujeron la capacidad fagocítica de los LTH. Hubo síntesis del pigmento en sangre inoculada con cepas de P. fluorescens a 4-C. la precipitación salina del plasma indicó que las fracciones ricas en globulina y albúmina retuvieron pioverdina en distintos porcentajes (46% y 37% respectivamente). Mediante diálisis se observó que la fracción con albúmina mantenía mayor cantidad del pigmento unido e en estado de agregación

Presencia de proteasas extracelulares en Pseudomonas aeruginosa / Presence of extracellular proteases in Pseudomonas aeruginosa

Se cuantificó la actividad proteolítica y elastásicaa de 32 cepas de Psudomonas aeruginosa, provenientes de distintas infecciones en humanos. Se diagramaron métodos fotocolirimétricos con sustratos insolubles derivados de polvo de piel unido covalentemente a azul de remazol (HPA) y elatina coloreada con rojo congo (ERC). El 100% de las cepas presentaron actividad proteolítica sobre HPA y el 56,25% resultaron positivas con el sustrato elastina siendo más elevados los valores de unidad enzimática por ml para el primero

Klebocinas K6 y K150: producción y actividad en diferentes condiciones experimentales / Klebocins K6 y K150: production and activity in various experimental conditions

Se investigó la produción de bacteriocina en cepas de Klebsiella pneumoniae aisladas de pacientes con diversas infecciones. Mediante el método de estrías cruzadas se encontraron dos cepas capaces de inhibir el crecimiento de un alto número de bacterias de la misma especie. La Klebocina K150 presentó mayores halos de inhibición y un espectro de Klebsielas sensibles más amplio que la K6. Ambas se produjeron en medios complejos pero no se pusieron en evidencia en los medios de cultivo sintéticos empleados; la cepa 150 fue incapaz de elaborar bacteriocina en agar nutritivo, triptosa-extracto de carne y eosina-azul de metileno, mientras que la cepa 6 sintetizó la klebocina en todos excepto en triptosa-extracto de carne. Laa K150 es más susceptible al tratamiento con calor que la K6. Se estimó el peso molecular de las bacteriocinas como inferior a 10.000 D. Laa producción de bacteriocina se presentó asociada a la capacidad de hemolizar glóbulos rojos y a la actividad de lipasa. Además las cepas Klebocina-positivas se caracterizaron por un espectro de multiresistencia a antimicrobianos que las diferenció de otras cepas, resistentes

Hemolisinas bacterianas / Bacterial hemolysins

Hemolytic activity has been reported in bacteria of different genera. They were associated with a cytotoxic effect on erythrocytes by means of membrane damage which can results in a rearragement and disruption of the bilayer; in this case, they are considred cytilysins. They action mechanism of a hemilysins group is done by phospholipase activity on hydrophobic regions of membranes, this enzymatic action causes a pertubation that lyses erythrocytes of different animal species. The behavior of other bacterial hemolysins tends to resemble that detergents, bacause they have a very strong activity on surface, they have relatively low hemolytic effect and exhibit a broad spectrum of sensitive cells, without preference for a particularerythrocyte species. A third group of hemolysins encloses the lysins activated by SH compounds, sometimes called "oxygen-labile emolysins", they share common properties; all of them are irreversibly inactivated by low concentrations of cholesterol, the oxygen effect can be abolished by reducing agents, they are inmunologically related to one another and the temperature reduces their activity. The SF form of these lysins is active. -S-S-form obtained by oxydation us ubactuve abd does not interact with erythrocytes. Cholesterol represents the primary lysin acceptor of membrane, but there are some differences among the thiol-dependent cystolysins in: the reversibility of binding to membrane, the activity at -C and the damage caused in membranes with distinct leakage of cytoplasmic material ino the surrounding medium. The biggest group of hemolysins includes then lysins with an unknown mode of action, it comprises cytolysins of Gram-negative and Gram-positive bacteria. Althought the mechanisms of cell damage were studied by many investigators, the majority of hemolysins action mechanisms must be discovered. In the last years it was proposed that some bacterial lysins can act like other substances that pertub the membrane integrith by an important and very widespread mechanism of formation of transmembrane pores, with insertation of alien proteins into the lipid bilayer. When more hemolysins will be detected new characteistics and mode of actions will be more hemolysins will be detected new characteristics and mode of actions will be described, and the role if hemolysins in pathogeny will be best understood

Enterotoxinas y hemolisinas en Klebsiella pneumoniae / Enterotoxins and hemolysins in Klebsiella pneumoniae

Se estudió la capacidad de producir exterotoxinas en cepas de Klebsiellas pneumoniae aisladas de lactantes internados con septicemia y diarrea. La actividad enterotóxica se investigó mediante las pruebas del ratón lactante y del intestino ligado de conejo, determinando respectivamente el incremento del peso intestinal y la acumulación de fluido en los segmentos ligados. Los resultados indicaron que las bacterias provenientes de sangre, intestino y líquido cefalorraquídeo presentaron efecto semejante al observado con Escherichia coli enteropatógena, pero con mayor reacción inflamatoria. Las klebsiella se aislaron inicialmente de materia fecal y luego de sangre, originando finalmente meningitis, que resultó mortal en cuatro de los ocho casos estudiados. La entetoxina posee actividad hemolítica, pero difiere de la hemolisina activa en presencia de agentes reductores, porque tiene un rango de especies sensibles más amplio; no se inactiva por contacto con el oxígeno; no requiere de grupos sulfhidrilos libres para hemolizar eritrocitos; no pierde actividad a 60-C y sólo está presente en un número reducido de cepas con klebolisina, que es la hemolisina activada por agentes reductores como el 2 mercaptoetanol

Actividad hemolítica de Klebsiella pneumoniae sobre glóbulos rojos de conejo / Hemolytic activity of Klebsiella pneumoniae on rabbit erythrocytes

Se investigó la actividad hemolítica de Klebsiella pneumoniae, empleando cepas de referencia y cepas aisladas de infecciones. Todas las bacterias estudiadas resultaron hemolíticas en forma selectiva sobre eritrocitos de conejo. El frío intensificó el efecto lítico sobre los glóbulos rojos. Se estimó la capacidad hemolítica de las cepas mediante el diámetro de los halos producidos alrededor de orificios inoculados con 5 micron**l de suspensiones bacterianas. Cuando se realizó la detección de hemolisis en medios líquidos, sólo fue posible evidenciar lisis franca al tratar los cultivos con ciertos agentes reductores; de los cuales el más efectivo resultó el 2 mercaptoetanol. A la misma concentración los demás agentes químicos utilizados dieron menor porcentaje de eritrocitos lisados. La actividad hemolítica apareció en los cultivos durante la fase exponencial del crecimiento bacteriano y al cabo de 24 horas disminuyó al 33% del valor máximo alcanzado. Tanto la hemolisina cruda como la purificada reqirieron SH-activación y fueron inhibidas por suero

Nueva hemolisina oxígeno- lábil en Klebsiella pneumonial / New oxygen- labile hemolysin in Klebsiella pneumoniae

Se investigó la incidencia de hemolisinas en Klebsiella pneumoniae procedentes de cipas mantenidas en colección y de aislamientos a partir de materiales biológicos, encontrándose en el 100% de las cepas estudiadas actividad hemolítica selectiva sobre eritrocitos de conejo. Fue posible purificar dos fracciones hemolíticas a partir de los sobrenadantes de cultivo. Ambas result ron sulhidrilactivadas dependientes del tratamiento con agentes reductores y presentaron similitud con otras hemolisinas oxígeno-lábiles, en cuanto al mecanismo de acción e inhibidores. Mediante precipitación salina, filtración en gel Sephadex G-100, electroforesis en poliacrilamida y cromatografía en DEAE-Sephadex, se lograron separar dichas hemolisinas de proteínas contaminantes, una de las cuales tienen un efecto inhibitorio sobre la actividad hemolítica. Se alcanzaron porcentajes ejevados de recuperación, sobre todo en los pasos del proceso de purificación fundamentados en diferencias de densidad de carga eléctrica de las macromoléculas. Si bien la separación de las dos fracciones hemolíticas induce a pensar en estructuras químicas distintas por tener tamaño y carga eléctrica diferente, resulta sugestivo el hecho que comparten varias propiedades: activación de grupos sulfhidrilos, selectividad sobre eritrocitos de conejo, comport amiento frente al tratamiento térmico, pH óptimo, mecanismo de acción, inhidición por colesterol y cationes divalentes. En función de ello no se sugiere una denominación individual por el momento. Las hemolisinas purificadas constituyen el primer ejemplo de lisinas tiol-activadas en bacilos Gramnegativos

Infeccion natural de Akodon dolores,Thomas, 1916 (Rodentia, Cricetidae) por el Trypanosoma cruzi. / Natural infection of Akodon dolores,Thomas,1916 (Rodentia, Cricetidae) by Trypanosoma cruzi

El estudio morfobiometrico y biologico de tres cepas de tripanosomas de una poblacion de Akodon dolores de la zona periurbana del municipio de Las Higueras, provincia de Cordoba, Argentina, demostro que se trataba de T. cruzi. Como el 15% de 134 A. dolores examinados en la zona habia demostrado tripanosomas cruziformes, se concluye que este roedor e sun reservorio frecuente del parasito.El A. dolores es la especie numericamente dominante en la comunidad de roedores que vive en los habitats de mayor estabilidad en la region. Debe investigarse el ciclo de transmision silvestre asi como su relacion con el domiciliario en esta zona de baja endemicidad de enfermedad de Chagas en el hombre